Anal. Chem.|胡馳/狄斌團隊發表葫蘆脲介導的PCR法實現基因轉錄與代謝産物的同步檢測

發布者:朱功春發布時間:2023-01-09浏覽次數:520


近日,國際著名期刊Analytical Chemistry (IF: 8.0)在線發表了我校伟德官网下载客户端胡馳/狄斌團隊題為“Teaching PCR for Simultaneous Sensing of Gene Transcription and Downstream Metabolites by Cucurbit[8]uril-Mediated Intervention of Polymerase Activity”的最新研究成果。課題組碩士王蘭程/徐銘傑為本文的共同第一作者,公安部禁毒情報技術中心總工程師王優美、藥學院狄斌教授、伟德官网下载客户端胡馳副教授為本論文的通訊作者,伟德官网下载客户端為本論文的第一通訊單位。

近年來,胡馳/狄斌團隊圍繞精神活性物質的關鍵标記物分析檢測方法開展了大量研究工作(Toxicol. Lett. 2022, 367, 88-95; J. Hazard. Mater. 2023, 443, 130147; Anal. Biochem. 2022, 659, 114936)。本研究在前期工作基礎上,建立了一種全新的策略,将經典PCR法的檢測對象由核酸拓展為遺傳和代謝标記物的雙模态檢測。該方法簡單的通過在商品化PCR試劑盒中加入葫蘆脲對Taq DNA聚合酶的活性進行操縱。葫蘆脲與非離子表面活性劑結合并将其從Taq DNA聚合酶表面置換,導緻酶活性降低。同時,當樣品中存在鳥氨酸脫羧酶的下遊代謝産物精胺時,精胺與表面活性劑競争性結合葫蘆脲,使聚合酶活性得到恢複。該方法不僅減少了假陽性結果,而且擴大了PCR技術的檢測範圍。例如,使用此方法僅在高活性HEK 293T細胞中觀察到陽性結果,而經鳥氨酸脫羧酶抑制劑處理的沉默細胞顯示出陰性讀數,因此為精确診斷提供了一種簡單便捷的雙模态PCR方法。

原文鍊接:https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c01103

雙模态PCR法檢測示意圖

供稿單位:伟德官网下载客户端制藥與環境工程系)


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